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      如何減少柱外體積

      發(fā)表時(shí)間:2022-09-09      點(diǎn)擊次數(shù):820
      如何使柱外體積達(dá)到最小?

      第一,進(jìn)樣體積。要確保把進(jìn)樣體積控制在最小。


      第二,樣品溶劑。盡量保持樣品的溶劑強(qiáng)度等于或小于初始流動(dòng)相。如果必須使用*的有機(jī)溶劑作為樣品溶劑,那么要盡可能減少進(jìn)樣量。


      第三,柱前管路。需要確保您使用的是最小內(nèi)徑的管路。請注意,在樣品流路中使用幾種不同內(nèi)徑的管路可能會(huì)導(dǎo)致額外的擴(kuò)散。對于梯度分離,通??梢院雎灾肮苈穼χ怏w積的影響,但是,這個(gè)體積會(huì)對梯度延遲體積有影響。


      第四,熱交換器體積。有些儀器有不同體積的熱交換器可供選擇。當(dāng)使用高柱溫時(shí),這有助于使流動(dòng)相與色譜柱之間的溫度相匹配。您需要使用與流速一致的最小體積的熱交換器,特別是對于2.1mm內(nèi)徑色譜柱。


      第五,柱后管路。需要確保您使用的是最小內(nèi)徑的管路。請注意,在樣品流路中使用幾種不同內(nèi)徑的管路可能會(huì)導(dǎo)致額外的擴(kuò)散。對于20-50mm 2.1mm內(nèi)徑的色譜柱,75或100μm內(nèi)徑的管路可能會(huì)提供更好的結(jié)果,但是這會(huì)產(chǎn)生更高背壓。


      第六,流通池體積。對于2.1mm和3mm內(nèi)徑的色譜柱,通常使用1-5μl的流通池。更大的流通池通常用于4.6mm內(nèi)徑更長的色譜柱。

      常規(guī)HPLC儀器的優(yōu)化
            如果您沒有UHPLC儀器,不用擔(dān)心。您可以通過以下幾個(gè)方面來優(yōu)化您的系統(tǒng)以獲得更高的性能。

           
            當(dāng)在常規(guī)的HPLC儀器上使用高效的SPP色譜柱(如HALO)時(shí),我們建議您按照以下幾個(gè)步驟進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化。先從簡單、便宜
      的優(yōu)化開始,然后根據(jù)需要再進(jìn)行更復(fù)雜和更昂貴的優(yōu)化。一旦您取得了可以接受的結(jié)果,您可以選擇放棄后續(xù)的優(yōu)化。


      第一,減少檢測器的響應(yīng)時(shí)間,提高數(shù)據(jù)采集頻率。將檢測器響應(yīng)時(shí)間設(shè)置為小于0.1秒,并且數(shù)據(jù)采集頻率大于20Hz。


      第二,將進(jìn)樣體積減少到最小,并確保能達(dá)到可接受的峰值響應(yīng)。

         
           第三,確保樣品溶劑強(qiáng)度比流動(dòng)相弱。如果這不能滿足,那么需要對您的進(jìn)樣體積有所限制。如果是梯度分離,那么您能夠注入比等度分離更多的樣品。然而,保持樣品溶劑強(qiáng)度小于初始流動(dòng)相的強(qiáng)度仍然是重要的。
        

      第四,使用體積更小,長度更短的管路。


      第五,使用更小的流通池。

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